一、實驗目的:
新疆天康生物股份有限公司選用小美超聲的非接觸式DNA打斷儀來對樣品支原體細菌處理后提取樣品中的蛋白,提取的蛋白濃度越高越方便她們下一步的實驗。
二、產(chǎn)品特點:
1.處理量大,一次可以處理11個2ml的樣品或者22個0.65ml的樣品
2.沒有專用耗材,實驗室中常用的離心管即可;
3.采用4℃低溫水浴超聲波,能量分布均勻,樣品在低溫環(huán)境下進行破碎,防止變性。
4.儀器采用非接觸式進行超聲破碎,避免樣品間的交叉污染
5.提取蛋白濃度相比傳統(tǒng)探頭時超聲波細胞破碎儀濃度更高,效率更高。
三、裝機準備
1、打開外包裝,將非接觸式DNA打斷儀設備的所有配件取出,等待使用
2、將冷水機進水并將進出水口水管與儀器主機進出水口連接;
2、通電,先將電源線接到確保有點的插座,試試儀器是否通電。
3、儀器外包裝及說明書和各種零配件,拆開后保存收好;
四、實驗準備:
1、提前培養(yǎng)好的菌液
2、或將菌液從冰箱中取出,化凍;或者放入恒溫水浴鍋中40℃以下進行解凍處理
3、2ml離心管一包
五、實驗步驟:
1、將提前準備的菌液分別加入到8個2ml離心管中,分別向離心管中加入500ul、250ul、125ul、62.5ul;(每兩個離心管為一組加入相同體積的樣品),設置儀器功率百分之100,超聲時間30min,取出樣品進行蛋白定量實驗,實驗結果顯示,樣品體積在125ul時效果較好。
2、再將提前準備好的樣品菌液分別加入到6個2ml離心管中,分別向離心管中加入125ul、100ul、75ul;(每兩個離心管為一組加入相同體積的樣品),設置儀器功率百分之100,超聲時間30min,取出樣品進行蛋白定量實驗,實驗結果顯示,樣品體積在100ul時效果較好。
3、前兩步實驗目的是通過確定時間,不同體積的梯度實驗,得出樣品在100ul時破碎效果較好,再準備10個2ml離心管通過確定體積,不同時間的梯度實驗,再得出樣品量在100ul時破碎多久效果較好。
4、分別向10個2ml離心管中各加入100ul提前準備好的菌液,放入儀器適配器進行超聲破碎,超聲功率百分之100,分別在樣品破碎25min、30min、35min、40min、45min時各取兩個樣品,通過進行蛋白定量,實驗結果顯示,確定樣品體積的情況下(100ul),40min時蛋白濃度較高。
5、本次實驗結果顯示,支原體細菌使用非接觸DNA打斷儀進行蛋白提取時,樣品體積100ul,破碎40min,實驗效果蛋白定量濃度為406ug/ml。
六、儀器注意事項
1.細胞破碎結束后請關閉電源;
2.使用完成后,拿酒精進行內腔的擦拭消毒
七、實驗結果
實驗一結果:
實驗二結果:
實驗三結果: